FLT3配基基因在人骨髓基质细胞中的表达

• 作者: 刘元林 唐佩弦 张毅 朱馥丽 毛宁
• 来源期刊: 中华血液学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: FLT3配基 骨髓基质细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 65-67
• 页数: 3页
• 分类号: R55
• 字数: 2757字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0253-2727.2002.02.002

摘要

目的构建人FLT3配基(FL)逆转录病毒载体,并观察其在人骨髓基质细胞中的表达.方法用基因重组技术,将FLcDNA插入逆转录病毒载体pLXIN,获得重组载体pLFIN.采用脂质体法将重组质粒pLFIN转染包装细胞PA317,G418筛选抗性克隆,用抗性克隆上清液感染人骨髓基质细胞,RT-PCR和基因组DNA-PCR检测外源基因mRNA的转录及染色体的整合,ELISA法和小鼠CFU-GM集落形成法检测FL蛋白表达量和生物学活性.结果酶切鉴定表明成功构建重组逆转录病毒载体pLFIN;染色体基因组中整合有外源基因FL和Neo;在mRNA和蛋白质水平均可检测到FL表达;24 hFL蛋白表达量为4.35 ng/ml,活性测试结果显示转染的骨髓基质细胞分泌FL.结论逆转录病毒介导的FL在骨髓基质细胞中获得表达,并具有良好的生物学活性,为进一步研究转基因骨髓基质细胞对造血调控的影响提供了实验依据.