水稻小GTP蛋白OsRab5A的表达、纯化和GTP结合分析

• 作者: 刘筱斌 刘良式 林慧贤 梁承邺
• 来源期刊: 中山大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 水稻 Rab蛋白 GTP结合
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 页码范围: 60-63
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 598字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-6579.2002.03.017

摘要

小GTP结合蛋白是一类在细胞内的运输过程中重要作用的蛋白.它们通过结合子GTP而激活,当GTP被水解为GDP后处于非活性状态.哺乳动物中的研究表明,Rab5A蛋白是细胞内的形成早期内吞体(early endosome)的限速因子.证实了所克隆的水稻rab5A基因编码的蛋白具有GTP结合功能.将Osrab5A基因的编码序列按正确读码框重组到pGEX4T1载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),电泳判定插入片段大小无误后,进一步测序鉴定其读码也无误.将该克隆命名为pG-5AE .以IPTG诱导pG-5AE所编码的融合蛋白GST-OsRab5A的表达.SDS-PAGE电泳与无外源质粒和表达谷胱甘肽硫转移酶(GST)的对照相比,得到了预计大小的融合蛋白.以GSTrapTM亲和柱纯化融合蛋白.在不同的泳道分离纯化的融合蛋白和作为对照的含GST以及无外源蛋白的细菌总蛋白,电转移到硝酸纤维膜上.将该膜与α-32PGTP温育,洗膜,放射自显影后,获得了融合蛋白结合GTP的结果,这表明在原核中表达出的水稻Rab5A蛋白能在体外结合GTP.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘良式	中山大学基因工程教育部重点实验室与生物工程研究中心	23	209	8.0	14.0
2	梁承邺	中国科学院华南植物研究所	83	1688	22.0	38.0
3	林慧贤	中山大学基因工程教育部重点实验室与生物工程研究中心	4	69	3.0	4.0
4	刘筱斌	中国科学院华南植物研究所	3	30	2.0	3.0