人颗粒酶B融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用

• 作者: 张淼丽 李继硕 杨安钢 王成济 许彦鸣 贾林涛 赵晶 金明
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: granzyme B 融合蛋白 HeLa细胞 表达
• 年，卷（期）: 2002,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 113-116
• 页数: 4页
• 分类号: Q255
• 字数: 2823字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2002.02.005

摘要

目的观察颗粒酶B(granzyme B)融合蛋白对转染的HeLa细胞的作用. 方法用RT-PCR法获取人granzymeB全长cDNA,经重组PCR将活性型序列的5′端与一段PE转膜肽序列融合.将所获重组基因克隆入绿色荧光蛋白(GFP)共表达载体pIRES2-EGFP,转染HeLa细胞.用免疫组化染色法检测目的蛋白的表达,荧光显微镜和电镜观察转染细胞的形态和结构.结果成功地获得了野生型granzyme BcDNA及其融合蛋白基因,并构建了融合蛋白基因与GFP基因共表达的真核载体.转染HeLa细胞后,检测到目的蛋白的表达.荧光显微镜观察转染细胞有两种变化:一种表现为体积增大并常伴随多核现象;另一种出现细胞质和细胞核的固缩.电镜观察显示,多核巨细胞生长状态良好,固缩的小细胞则呈现凋亡的典型特征.结论 granzymeB融合蛋白在HeLa细胞中异位表达,可使转染细胞的形态发生变化,出现多核的大细胞和核固缩的小细胞.