HBV耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法的建立

• 作者: 丁静娟 张伟三
• 来源期刊: 医学文选
• 学科: 医学
• 关键词: 聚合酶链反应,限制性片段长度多态性分析 拉米夫定 乙型肝炎病毒,基因变异 耐药
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 270-273
• 页数: 4页
• 分类号: R373.2
• 字数: 2638字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-6575.2002.03.002

摘要

目的建立一种简便、准确、实用的乙型肝炎病毒(HBV)耐拉米夫定多聚酶基因变异检测方法.方法根据已公布的HBV DNA序列,在HBV多聚酶基因区设计并合成了两对寡核苷酸引物,其中一只为错配引物;应用巢式错配聚合酶链反应特异性扩增含有HBV多聚酶基因YMDD基序的片段,扩增产物用限制性内切酶(Nde Ⅰ)酶切,琼脂糖凝胶电泳,观察酶切后的目的片段限制性片段长度多态性(RFLP)图谱.部分标本进行DNA测序.结果 (1)所建立的巢式错配PCR-RFLP方法操作简便,快速,从DNA提取到酶切后电泳分析仅需要11小时;灵敏度高,可以检测到103copies/ml的HBV DNA;特异性强,结果准确,经DNA测序证实.(2)应用该方法对20例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎患者的系列血清进行了检测,发现YMDD变异者(45%)9例,YMDD野毒株者(55%)11例,表明该方法可有效地鉴别HBV YMDD野毒株与变异株.结论本实验所建立的巢式错配PCR-RFLP方法简单、敏感、特异,适合于一般实验室应用及大规模的人群调查.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁静娟	贵阳医学院附院感染科	19	63	5.0	6.0
2	张伟三	贵阳医学院附院感染科	4	17	3.0	4.0