杀菌蛋白DNA改组的初步研究

• 作者: 刘树玲 安小平 徐俊杰 徐静 王海涛 童贻刚 陈万荣
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 杀菌蛋白 DNA改组 定点整合
• 年，卷（期）: 2003,（3）
• 所属期刊栏目: 细菌学
• 页码范围: 161-164
• 页数: 4页
• 分类号: R37
• 字数: 3871字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2003.03.001

摘要

目的运用DNA家族改组方法提高杀菌蛋白(BPI23)的杀菌活性. 方法首先将人、猴、兔BPI23基因的PCR产物等量混合,用DNAaseⅠ消化,回收50bp左右的片段,再经无引物和有引物2步PCR反应获得与原基因大小相同的改组分子,将其与载体连接获得改组文库.应用Flp-InTM定点整合表达系统,将BPI23改组文库插入CHO细胞基因组中1个单拷贝位点,分别检测各个细胞克隆的杀菌活性,从中筛选高活性的BPI23改组分子. 结果经过2轮改组和筛选,共获得4个活性高于人BPI23约4倍的克隆,它们与人BPI23基因有7～13个氨基酸的变化. 结论探索了在CHO系统中进行DNA改组和筛选的方法与技术路线,成功进行了杀菌蛋白的改组,并为其它分子的改组提供了借鉴.