人酪氨酸羟化酶全长及催化结构域序列表达产物酶活性比较

• 作者: 于培兰 徐群渊 杨慧 熊英
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 酪氨酸羟化酶 催化结构域 野生型酶 融合蛋白表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 129-134
• 页数: 6页
• 分类号: R322
• 字数: 4787字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-7547.2003.02.003

摘要

采用人的全长酪氨酸羟化酶cDNA为模板,设计特定的引物进行PCR扩增反应,获得编码N-端缺失141个氨基酸的催化结构域cDNA片段,将其插入谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体pGEX-4T-1中,构建表达质粒pGEXTHc,同时构建其全长片段的表达质粒.pGEXTHa.两者分别转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导可高效表达,产物以可溶形式存在,经亲和层析纯化后以蛋白酶裂解,再经亲和层析分离得到较纯的酶蛋白,采用高效液相色谱法(HPLC-ECD)检测酶活性,结果证明催化结构域活性高于全酶,是全酶活性的2.96倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨慧	首都医科大学北京神经科学研究所	124	633	13.0	17.0
2	徐群渊	首都医科大学北京神经科学研究所	140	593	11.0	17.0
3	于培兰	首都医科大学生物化学教研室	32	194	9.0	12.0
4	熊英	首都医科大学生物化学教研室	23	95	6.0	7.0