配体依赖性Cre重组酶在培养肝细胞中介导条件性基因激活

• 作者: 成国祥 曹莹莹 朱焕章 薛京伦
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Cre重组酶 诱导性基因表达 肝脏 碱性磷酸酶 lacZ
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 435-440
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 语种: 英文

摘要

嵌合性Cre重组酶与肝组织特异性调控区的结合使其在肝细胞上介导的条件性基因激活成为可能.为此,首先构建了在小鼠白蛋白基因调控区调控下的Cre-ERt表达载体(Alb-Cre-ERt), 然后将其构件分别转染工程化的BRL(大鼠肝细胞)和BRK(大鼠肾细胞)细胞株, 这些细胞携带的floxed-βgeo框架位于启动子与人碱性磷酸酶基因(hAP)之间,因而阻碍hAP表达.用1 μmol/L 4-羟基三苯氧胺(4-hydroxytamoxifen, 4-OHT)处理后,经碱性磷酸酶染色,部分BRL细胞显示碱性磷酸酶染色阳性;用PCR方法证实Cre重组酶介导了floxed-βgeo框架的切除.然而,在未用4-OHT处理的BRL细胞未观察到碱性磷酸酶染色阳性细胞, 在用4-OHT处理或未处理的BRK细胞同样未观察到碱性磷酸酶染色阳性细胞.这些结果表明已成功构建肝细胞特异表达Alb-Cre-ERt载体, 并在表达Cre融合蛋白的BRL细胞证实4-OHT能够诱导Cre介导的DNA重组,从而激活碱性磷酸酶报告基因的表达.该研究将为进一步建立肝细胞特异表达Cre-ERt转基因小鼠奠定基础.