抗人肝癌单克隆抗体HAb18 Fd及轻链基因的克隆与鉴定

• 作者: 宋斐 张思河 杨向民 邢金良 陈志南
• 来源期刊: 中国肿瘤生物治疗杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 肝癌 单克隆抗体 基因 克隆
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 105-109
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 3100字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3872/j.issn.1007-385X.2003.02.007

摘要

目的:克隆抗人肝癌单抗HAb18 Fd及轻链基因,并对其可靠性和准确性进行验证.方法:从分泌单抗HAb18的杂交瘤细胞株中提取总RNA,利用RT-PCR扩增抗体Fd及轻链基因,连入pMD18T载体后,挑选阳性克隆进行序列测定并利用相应的软件对序列进行分析.然后将轻链及Fd基因依次克隆到噬菌体展示载体pComb3中,转化大肠杆菌XL1-blue并利用辅助噬菌体M13K07进行挽救,收获噬菌体后利用间接ELISA方法检测其抗原特异性.结果:扩增的HAb18全长轻链和Fd基因大小分别为665 bp和668 bp,序列分析显示:VH及VL均含有2个特征性的半胱氨酸,CH1属于IgG1亚类,CL属于κ亚型.ELISA证实,Fab基因表达产物具有与相应抗原特异结合的活性.结论:成功克隆了肝癌单抗HAb18的Fd及轻链基因,为下一步构建多种形式的基因工程抗体奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈志南	第四军医大学细胞工程研究中心	114	603	12.0	18.0
2	邢金良	第四军医大学细胞工程研究中心	35	135	8.0	9.0
3	张思河	第四军医大学细胞工程研究中心	23	106	6.0	9.0
4	杨向民	第四军医大学细胞工程研究中心	25	102	6.0	8.0
5	宋斐	第四军医大学细胞工程研究中心	6	13	2.0	3.0