人源性TRAb Fab段单克隆抗体的筛选和鉴定

• 作者: 方佩华 李宁 杜晓明
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 受体,促甲状腺素 抗体,单克隆 免疫球蛋白Fab片段 细菌噬菌体 噬菌体展示库
• 年，卷（期）: 2017,（8）
• 所属期刊栏目: 细胞与分子生物学
• 页码范围: 851-855
• 页数: 5页
• 分类号: R581
• 语种: 中文
• DOI: 10.11958/20170531

摘要

目的 通过噬菌体表面展示技术,运用已构建的人源性噬菌体抗体库,筛选、表达人源性促甲状腺激素受体抗体(TRAb)Fab段.方法 以人TSHR膜外区的氨基端(hTSHRn)、人TSHR膜外区的羧基端(hTSHRc)的融合蛋白为抗原,通过数轮"吸附-洗脱-扩增"富集噬菌体抗体,筛选阳性克隆.从已构建的抗体库中筛选到甲状腺刺激性抗体(TSAb)Fab、甲状腺阻断性抗体(TBAb)Fab,噬菌体(Phage)-ELISA检测选取阳性克隆,PCR及双酶切鉴定TRAb阳性克隆.检测可溶性TRAbFab片段阳性克隆的表达,Western blotting鉴定TRAb阳性克隆的免疫学活性,对TRAbFab阳性克隆进行测序分析.结果 经过5轮富集筛选,成功筛选到特异性TRAb(TSAb、TBAb)Fab噬菌体抗体,产率分别提高约77、94倍.通过Phage-ELISA检测,鉴定出了具有抗原结合活性的单克隆抗体,实现可溶性表达.Western blotting证实其免疫学活性.测序分析单克隆48的轻链可变区与人的免疫球蛋白轻链Vλ同源性达到94.4%,重链可变区与人的免疫球蛋白IgG重链VH4同源性为88.9%.克隆56的轻链可变区与人的免疫球蛋白轻链Vλ同源性达到95.6%,重链可变区与人的免疫球蛋白IgG重链VH3同源性为84.6%.结论 本研究通过成功筛选获得人源性TRAb(TSAb、TBAb)Fab片段的单克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李宁	天津医科大学总医院核医学科	60	243	8.0	12.0
2	方佩华	天津医科大学总医院核医学科	94	705	14.0	22.0
3	杜晓明	天津市第四中心医院内分泌科	5	8	1.0	2.0