摘要:
目的在正常生理与病理状态下成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板源性生长因子(PDGF),转化生长因子β(TGF-β)三种生长因子调节骨的生长发育,影响骨折的愈合过程,本研究探索在体外培养条件下该三种因子对新西兰白兔骨髓基质细胞增殖与分化的影响,为下一步观察这些因子与其它因子联合应用提供基础研究资料.方法抽取新西兰白兔股骨上穿刺点骨髓进行体外原代培养,分离骨髓基质细胞(Marrow stromalcells,MSC),于第12d行传代培养,以2×103个细胞/孔,定量接种于96孔板中,同时按照不同剂量加入上述三种因子,分别在培养第10d时用酶动力法检测碱性磷酸酶活性,在培养第5d细胞近于汇合时用MTT法检测细胞的增殖情况.结果①随着bFGF剂量增加,MSC ALP活性呈下降趋势,当bFGF浓度超过100ng/ml后OD值波动在0.020~0.005之间,仅是对照组的1/3弱(P<0.01),表明MSC ALP活性受到了明显的抑制.MTT结果显示,OD值随着bFGF的剂量增加而明显上升,最高值(浓度为600ng/ml时)比对照组高出近一倍,表明bFGF明显促进MSC增殖,有剂量依赖性(dose-dependent)但当浓度高于800ng/ml时,OD值不高于对照组,甚至低于对照组,表明较高浓度的bFGF抑制MSC增殖;②与对照组比较随PDGF应用剂量增加,各组MSCALP活性值及增殖略有上升,但无显著性差异,表明PDGF对MSCALP活性及其增殖影响不大;③TGF-β对MSC ALP活性和其增殖均有一定的促进作用,但在提高MSC ALP活性方面,它不及srhBMP2m(另行发表);在促进MSC增殖方面,它又没有bFGF的作用强.结论由于三种因子对MSC成骨活性的双向性作用,我们不主张单独使用它们刺激MSC,使之成为骨组织工程的工程细胞.