内皮细胞抑制素在毕节酵母中的表达与活性分析

• 作者: 吴江雪 吴群悦 张添元 符武钊 罗进贤
• 来源期刊: 中山大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 人内皮细胞抑制素 基因表达 毕节酵母 高密度发酵 纯化与生物活性分析
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 页码范围: 83-86
• 页数: 4页
• 分类号: Q95-336
• 字数: 2493字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-6579.2003.06.021

摘要

采用PCR技术从人胎脑cDNA库中扩增了人内皮细胞抑制素基因.经DNA序列分析后将扩增的基因克隆至酵母载体pPIC9K,获得的重组质粒pPIC9K-EDN转化毕节酵母GX115,构建表达内皮细胞抑制素的酵母工程菌P.pastorisGS115(ppIC9K-EDN).SDS-PAGE分析结果显示:人内皮细胞抑制素在重组酵母GS115(pPIC9K-EDN)中获得高效表达.用30 L发酵罐构对建的工程菌进行高密度发酵,经甲醇诱导48 h,生物量达到250 OD,分泌量为150 mg/L,发酵液经 SP Streamline,SP Sepharose FF阳离子交换柱和Sepharose Heparin Hi Trap柱纯化,产物纯度达到98%.纯化产物具有免疫活性并能抑制bFGF诱导的鸡胚绒毛尿囊膜血管生成.