重组人β-干扰素的表达、纯化与鉴定

• 作者: 余奇文 席波 张冬青 李宁丽 聂红 马安伦 龚毅
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 工学
• 关键词: 重组人β-干扰素 亲和层析 酵母菌 酶联免疫吸附试验 细胞病变抑制
• 年，卷（期）: 2003,（11）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1035-1039
• 页数: 5页
• 分类号: TQ92
• 语种: 英文

摘要

经15 L发酵罐制备重组人β-干扰素(recombinant human IFN-β, rhIFN-β). 以免疫亲和层析方法纯化发酵液中rhIFN-β并与蓝谱亲和层析纯化法比较, 探索快速高效纯化rhIFN-β的方法. 以ELISA测定rhIFN-β含量及经免疫亲和层析纯化的rhIFN-β中鼠IgG残留量; 以PAGE法鉴定rhIFN-β的分子量; 以CPEI法测定rhIFN-β的生物活性. 取2 L发酵液经免疫亲和层析纯化后, 得到3.03 mg rhIFN-β; 经蓝谱亲和层析纯化后, 得到2.65 mg; 分子量为22 kD; 沉淀带灰度值分别为96.2 %和95.1 %; CPEI比活性分别为1.43×107 IU/mg 和1.63×107 IU/mg; 经免疫亲和层析后纯化物中鼠IgG残留量小于50 μg/L. 实验结果表明, 所采用的免疫亲和层析和蓝谱亲和层析均可快速高效地从酵母菌发酵上清液中分离纯化rhIFN-β基因产物.