脑红蛋白与Na+ ,K+ -ATP酶β2亚基的相互作用及作用位点的鉴定

• 作者: 余利红 孟凡伟 尹昭云 廖志勇 张成岗 张永亮 徐文琳 王新兴 王春丽 钱令嘉
• 来源期刊: 生物化学与生物物理学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 脑红蛋白 Na+ ,K+-ATP酶 酵母双杂交系统 蛋白质相互作用 免疫共沉淀
• 年，卷（期）: 2003,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 823-828
• 页数: 6页
• 分类号: Q189
• 语种: 英文

摘要

为研究神经系统特异性携氧蛋白--脑红蛋白(NGB)保护神经元耐受缺氧损伤的分子机制, 利用酵母双杂交系统从人胎脑cDNA文库中筛选与其有相互作用的蛋白质.序列分析表明, 其中一个克隆的编码产物与Na+ ,K+-ATP酶β2亚基(NKA1b2)序列一致.随后采用PCR方法从人胎脑cDNA文库中扩增获得NKA1b2全长cDNA.蛋白质结合实验表明, 原核表达的NGB与体外转录翻译得到的NKA1b2在细胞外有结合作用.免疫共沉淀实验证明二者在生理条件下能够以复合物的形式存在.利用NGB系列短截体研究相互作用的位点发现, NGB蛋白N末端1～75位氨基酸可与NKA1b2结合, 但结合力很弱, 而其C末端75个氨基酸则与NKA1b2无结合作用, 由此推测NGB蛋白整体的三维结构是结合所必需的.