dUTP/UDG反应体系在荧光定量PCR中抗污染能力评价

• 作者: 吴文兵 戴菁 王忠永 陈晓东 陶志华
• 来源期刊: 中国实验诊断学
• 学科: 医学
• 关键词: 尿嘧啶DNA糖基化酶 脱氧尿嘧啶 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 论著及论著摘要
• 页码范围: 94-97
• 页数: 4页
• 分类号: R373.2
• 字数: 2559字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-4287.2003.02.005

摘要

目的探讨dUTP/UDG反应体系在荧光定量PCR中抗PCR产物污染的能力.方法用TaqMan荧光定量PCR检测方法进行定量检测.将一系列不同浓度的含dUTP的HBV-DNA PCR扩增产物作为污染源,分别加至含dUTP/UDG的PCR反应体系和普通荧光定量PCR反应体系中,在荧光定量PCR仪上进行定量检测,从而得出含dUTP/UDG的PCR反应体系的抗污染能力.结果 1.最佳抗污染实验条件:UDG酶含量0.05 U,消化时间37℃5 min,灭活时间92℃1 min;dUTP100%代替dTTP,四种底物浓度相等.2.含0.05 U的UDG抗污染反应体系对每管浓度为103拷贝/ml的污染物可完全消化,并随UDG含量的增高及消化时间的延长,抗污染能力增强.结论 dUTP/UDG反应体系的应用能有效防止PCR产物污染,但抗污染能力是有一定限度的,尚需加强实验室标准化管理,才能真正达到抗污染效果.