HSV-tk/GCV自杀基因系统对视网膜母细胞瘤的体外抗肿瘤效应研究

• 作者: 张虹 李伟 李涛 李贵刚 梁峰 谢二娟
• 来源期刊: 眼科新进展
• 学科: 医学
• 关键词: 视网膜母细胞瘤 基因疗法 自杀基因 胸腺嘧啶核苷激酶 旁观者效应
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 305-309
• 页数: 5页
• 分类号: R774
• 字数: 2504字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-5141.2003.05.001

摘要

目的研究单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶/更昔洛韦(herpes simplex virus thymidine kinase-gancyclovir,HSV-tk/GCV)自杀基因系统对视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)细胞的体外杀伤作用以及旁观者效应发生的机制.方法应用阳离子脂质体将pCMV/hytk-IRES-hrGFP质粒导入人视网膜母细胞瘤株HXO-Rb44细胞,荧光显微镜下观察转染效果,并用潮霉素筛选出转染阳性细胞HXO-Rb44/tk.RT-PCR鉴定hvtk 基因在HXO-Rb44/tk细胞中的整合转录结果.比较转染前后Rb细胞的形态和生长特性.通过MTT法检测GCV对HXORb44/tk细胞的杀伤作用以及对不同比例HXO-Rb44/tk和HXO-Rb444混合细胞的杀伤作用("旁观者效应").并通过上清移换实验研究旁观者效应发生的机制.结果转染效率约为20%.HXO-Rb44/tk细胞mRNA经RT-PCR可检测出530bp 的hytk基因片段.转染前后Rb细胞的形态和生长特性无明显改变.HXO-Rb44/tk细胞对GCV7高度敏感,并表现出时间和剂量的依赖性.HSV-tk/GCV系统对Rb细胞的杀伤过程中存在明显的旁观者效应,而GCV作用的HXO-Rb44/tk细胞上清对HXO-Rb44细胞生长无影响.结论HSV-tk基因转移联合GCV治疗可作为视网膜母细胞瘤基因治疗的一种有效方法,GCV代谢产物通过细胞间缝隙连接进行转运可能是此系统旁观者效应的主要机制.