外源性细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因对人晶状体上皮细胞周期的影响

• 作者: 刘奕志 吴明星 曾骏文 李绍珍
• 来源期刊: 中华眼科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞周期 细胞周期蛋白类 转染 上皮细胞 晶体
• 年，卷（期）: 2003,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 209-214
• 页数: 6页
• 分类号: R77
• 字数: 5055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0412-4081.2003.04.005

摘要

目的研究细胞周期蛋白激酶抑制因子p21基因转染对人晶状体上皮细胞(lens epithelial cells, LEC)周期调控的影响,在基因水平探讨防治后发性白内障的可能性.方法构建含人p21基因真核表达的载体质粒pcDNA3/p21, 采用基因转染技术将质粒DNA转染至永生性人LEC系HLE-B3,使用流式细胞仪观察细胞生长和周期的变化,并采用逆转录聚合酶链式反应方法检测p21 mRNA的表达;分别采用免疫组化和免疫印迹(western blotting,WB)方法检测p21蛋白的表达.结果体外构建的载体质粒pcDNA3/p21经酶切鉴定含有人p21基因全长cDNA片段.基因转染后细胞HLE-B3经传代培养,48 h后出现缓慢生长且部分细胞漂浮死亡的现象,G1期细胞明显增多.与对照细胞比较,转染后细胞的p21 mRNA表达明显增多;p21蛋白表达明显增强,在经筛选的阳性克隆细胞中WB方法可检测到相对分子质量为21 000的阳性蛋白带.结论外源性p21基因可在人LEC系HLE-B3中过度表达,并对细胞周期调控产生抑制作用.基因转染抑制LEC增殖可能成为防治后发性白内障的新途径.