小鼠金属硫蛋白-Ⅰ在鱼腥藻7120中的融合表达及其纯化

• 作者: 俞梅敏 周杰 施定基 茹炳根 郝福英
• 来源期刊: 植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小鼠金属硫蛋白-Ⅰ 鱼腥藻7120 融合表达 亲合层析
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 发育与分子生物学
• 页码范围: 98-101
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 字数: 1422字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:1672-9072.2003.01.015

摘要

为了提高小鼠金属硫蛋白-Ⅰ(mMT-Ⅰ)在鱼腥藻7120(Anabaena sp.PCC 7120)中的表达量、便于表达产物的分离纯化,构建了新的穿梭融合表达载体pKG-MT.通过pKG-MT,mMT-Ⅰ cDNA在tac启动子的调控下,以与谷胱甘肽转硫酶(GST)C-末端相融合(GST-MT)的形式在鱼藻中表达.SDS-PAGE结果显示在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下GST-MT在鱼腥藻中表达.经谷胱甘肽亲合层析,从转基因藻中分离、纯化得到GST-MT.利用GSTC-末端的凝血酶酶切位点,用凝血酶对GST-MT进行柱上酶切,经Sephadex GS0除去凝血酶得到mMT-Ⅰ.SDS-PAGE表明纯化得到所要的目标产物;ELISA测定结果显示从每克转基因藻(鲜重)中可纯化得到0.9 mg mMT-Ⅰ;原子吸收测定表明纯化得到的mMT-Ⅰ的镉离子结合能力接近于天然MT.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	施定基	中国科学院植物研究所	66	1027	18.0	28.0
2	周杰	北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室	8	27	3.0	5.0
3	茹炳根	北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室	102	1233	20.0	29.0
4	俞梅敏	北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室	20	260	9.0	16.0
5	郝福英	北京大学生命科学学院蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室	6	64	3.0	6.0