斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA的克隆和表达

• 作者: 张艳玲 张锡林 段建华 段文元 王英
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 斯氏狸殖吸虫 半胱氨酸蛋白酶 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2003,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 24-28
• 页数: 5页
• 分类号: R383.2
• 字数: 4376字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2003.06.006

摘要

目的克隆斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段,并进行原核表达.方法利用简并引物,进行RT-PCR,扩增斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段.TA克隆装入pUCm-T载体,进行鉴定、测序;利用DNASIS程序推导其所编码的氨基酸序列,并与相关虫种半胱氨酸蛋白酶进行氨基酸序列的同源性分析.将获得的cDNA片段克隆入Pin-PointTMXa-1 T表达载体,经过筛选后,在大肠杆菌中进行原核表达.通过SDS-PAGE电泳和Western blot方法鉴定表达产物,并检测所表达融合蛋白的免疫反应性.结果 RT-PCR扩增出了一500bp左右的cDNA片段,对阳性克隆测序后获得其核酸序列,长498bp.推导出的氨基酸序列长166;氨基酸序列的同源性分析显示,该序列与相关虫种半胱氨酸蛋白酶存在着很高的同源性,组成半胱氨酸催化三联体的半胱氨酸、组氨酸和天冬酰胺残基高度保守.原核表达中,对表达产物的鉴定结果和免疫反应性检测结果均显示,目的克隆在33kDa处有一明显条带.结论本实验克隆获得了斯氏狸殖吸虫囊蚴半胱氨酸蛋白酶cDNA片段,其序列中包含了与该酶活性有关的重要位点.原核表达获得一33kDa的融合蛋白,该融合蛋白具有免疫反应性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张锡林	第三军医大学基础医学部病原生物学教研室	117	382	10.0	12.0
2	段建华	第三军医大学基础医学部病原生物学教研室	63	183	7.0	10.0
3	段文元	第三军医大学基础医学部病原生物学教研室	15	58	5.0	7.0
4	张艳玲	第三军医大学西南医院神经内科	49	320	11.0	15.0
5	王英	第三军医大学基础医学部病原生物学教研室	95	401	9.0	15.0