TLR-4信号转导通路介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达的研究

• 作者: 梁峰 王伯瑶 陈槐卿 黄宁
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-8 基因表达 内皮细胞 信号传递
• 年，卷（期）: 2003,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-5
• 页数: 6页
• 分类号: R364.5
• 字数: 4757字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2003.01.001

摘要

目的:观察TLR-4信号转导通路在层流低切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因表达中的作用.方法: 设计突变引物,用RT-PCR技术从血管内皮细胞扩增出胞内区段缺失突变TLR4 cDNA,用PCR技术从其DNA中扩增出IL-8上游调控序列(IL-8USCS),分别克隆于真核表达质粒pcDNA3及绿色荧光增强蛋白报告基因pEGFP1质粒,构建出重组TLR-4缺失突变基因真核表达质粒pcDNA3-mTLR4和IL-8 报告基因表达质粒pEGFP1-IL8USCS.用pEGFP1-IL8USCS 转染或pcDNA3-mTLR4和pEGFP1-IL8USCS共转染ECV304细胞,用4.2 dyne/cm2 层流切应力刺激 3 h,流式细胞仪观察荧光蛋白表达强度变化.细胞裂解物IκB免疫印迹和NF-κB p65免疫荧光细胞化学染色检测IκB的磷酸化及降解和NF-κB的活化.结果: 用pEGFP1-IL8USCS转染细胞,经层流切应力刺激 3 h 后荧光蛋白表达增强(1.06∶2.71),同样用pcDNA3-mTLR4和pEGFP 1-IL8USCS共转染细胞,层流切应力刺激 3 h 后荧光蛋白表达未明显增强.细胞裂解物免疫印迹显示,刺激 10 min 时磷酸化IκB即显著增强,1 h 后磷酸化IκB印迹强度几乎降到基线水平,而IκB随刺激时间延长而逐渐降低,1 h 后几乎测不到IκB. NF-κB p65免疫荧光细胞化学染色显示,切应力刺激 0.5 h,胞核即出现阳性反应,刺激1.5 h、2 h后,胞核呈强阳性染色.结论: 本研究提示,TLR4/NF-κB 信号转导通路可能介导层流切应力诱导血管内皮细胞IL-8基因的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄宁	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	131	466	11.0	16.0
2	王伯瑶	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	91	353	10.0	16.0
3	陈槐卿	四川大学华西医学中心生物医学工程研究室	69	786	17.0	25.0
4	梁峰	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	5	19	3.0	4.0