六聚组氨酸在重组蛋白中的位置对镍亲和层析的影响

• 作者: 万敏 卫红飞 张培因 王丽颖 许艳
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素-4 重组蛋白 六聚组氨酸 镍亲合层析
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 90-93
• 页数: 4页
• 分类号: R341
• 字数: 3714字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2004.02.007

摘要

目的研究六聚组氨酸在重组蛋白中的位置对镍亲和层析的影响.方法采用PCR法扩增目的基因,克隆入pMD18-T载体后进行序列测定.构建原核表达载体pET28-His-Cpn10-IL-4与pET28-Cpn10-His-IL-4,在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中表达两种在不同位置带有六聚组氨酸(His-tag)的重组白细胞介素4(rhIL-4)融合蛋白.用SDS-PAGE、Western印迹鉴定表达产物,采用镍亲和层析的方法纯化两种重组融合蛋白.结果 Western 印迹证实两种融合蛋白均可与抗组氨酸单克隆抗体特异性结合,但用镍亲和层析方法可以很好地分离纯化融合蛋白His-Cpn10-IL-4,却不能纯化融合蛋白Cpn10-His-IL-4.结论应用镍亲和层析的方法纯化融合蛋白时,His-tag在融合蛋白中的位置对蛋白质的纯化非常重要,His-tag可以在融合蛋白的N端和C端,但不能在中间.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张培因	吉林大学基础医学院分子生物学教研室	27	84	6.0	8.0
2	王丽颖	吉林大学基础医学院分子生物学教研室	82	282	9.0	13.0
3	卫红飞	吉林大学基础医学院分子生物学教研室	19	87	6.0	8.0
4	万敏	吉林大学基础医学院分子生物学教研室	24	116	5.0	10.0
5	许艳	吉林大学基础医学院分子生物学教研室	8	52	3.0	7.0