加载HCMV抗原肽的HLA-A*0201单体及其四聚体制备和鉴定

• 作者: 何贤辉 刘毅 徐丽慧 曾耀英 蔡小嫦
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人类白细胞抗原 四聚体 细胞毒T淋巴细胞 包涵体 人巨细胞病毒
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 蛋白质工程
• 页码范围: 382-388
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 6876字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.03.014

摘要

细胞毒T淋巴细胞(CTL)在控制病原体感染以及抗肿瘤过程中发挥重要作用,因而特异性CTL的检测相当重要;而过去检测CTL的方法都是间接的,最近发展起来的四聚体技术则是直接检测抗原特异性CTL的有效而特异的方法,成为目前研究T细胞免疫应答的关键技术.报道一种简化的四聚体制备程序,利用该程序成功制备加载人巨细胞病毒(HCMV)抗原肽的HLA-A2四聚体,具有特异性结合CTL活性.HLA-A*0201重链基因是通过RT-PCR方法从HLA-A2+供者白细胞中克隆,进而以PCR方法构建在羧基端融合生物素化酶BirA底物肽(BSP)的HLA-A*0201(A2)重链胞外区原核表达载体,A2重组蛋白在大肠杆菌中得到高表达,主要以包涵体形式存在.加载抗原肽的可溶性A2单体是A2胞外区在轻链β2微球蛋白和HLA-A2限制性HCMV pp55495-503抗原肽(NLVPMVATV,NLV)存在时通过稀释法复性获得,以BirA对其进行生物素化,然后以阴离子交换树脂纯化,得到的纯化A2-NLV单体与Streptavidin-PE按4:0.8比例混合形成四聚体,结合程度在85%以上,流式细胞仪分析显示该四聚体具有与HLA-A2+供者的特异性CTL结合活性.总之,这种简化的四聚体制备程序,不仅有利于该技术的推广,为特异性T细胞免疫研究建立必要的技术平台,而且A2-NLV四聚体在临床监测CMV特异性CTL水平等方面也有应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾耀英		300	2350	22.0	32.0
2	徐丽慧		69	509	13.0	20.0
6	何贤辉		98	770	16.0	23.0
7	蔡小嫦	暨南大学第一附属医院皮肤科	40	341	11.0	17.0
8	刘毅		17	129	6.0	11.0