人巨细胞病毒 pp65基因重组蛋白在昆虫细胞中的表达与分析

• 作者: 刘岚 吴东 孙永玉 王华林 胡志红 邓菲 邱红玉
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 重组蛋白质类 昆虫细胞学 巨细胞病毒属 免疫印迹法
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 331-334
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 4146字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1000-6680.2004.05.010

摘要

目的为了制备人巨细胞病毒(HCMV)pp65基因疫苗,应用Bac To Bac系统对HCMV pp65基因进行表达,并对重组蛋白质的特异性及生物活性进行确定.方法通过脂质体法用HCMV pp65基因重组病毒感染Sf9昆虫细胞,并在感染的不同时期收集细胞, 用特异性的HCMV pp65 MAb对重组蛋白进行Western blot,并选择HCMV IgG阳性及阴性的孕妇血清与重组蛋白进行免疫印迹反应. 结果重组Bacmid大分子DNA直接转染昆虫细胞可得到100%的阳性重组病毒,病毒滴度为3×107pfu/ml,重组病毒组在感染后48 h开始出现一相对分子质量为65 000大小的特异带,感染后72 h量明显增加,持续至感染后96 h,在野生型AcNPV感染细胞及正常昆虫细胞的空白对照中未见该蛋白带.Western blot显示目的蛋白条带与HCMV pp65 MAb发生特异反应.6例阳性血清中有5例与重组pp65发生特异性反应,而阴性对照组未见特异性反应带.结论 HCMV pp65基因可在Sf9昆虫细胞中有效表达,且所表达的重组蛋白pp65与人体中感染的野生型HCMV pp65具有相同的抗原性.因此有望为疫苗的制备打下基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴东	中国科学院武汉病毒研究所	129	1711	21.0	34.0
2	邓菲	中国科学院武汉病毒研究所	14	50	5.0	7.0
3	胡志红	中国科学院武汉病毒研究所	30	238	9.0	14.0
4	王华林	中国科学院武汉病毒研究所	13	75	5.0	8.0
5	刘岚	中国科学院武汉病毒研究所	2	5	1.0	2.0