肿瘤端粒酶靶向腺病毒载体的表达活性

• 作者: 吴孟超 吴红平 姜梨华 崔贞福 李林芳 王星华 苏长青 钱其军 钱炎珍
• 来源期刊: 实用癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因治疗 腺病毒 端粒酶 启动子 绝缘子
• 年，卷（期）: 2004,（5）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 449-453
• 页数: 5页
• 分类号: R735
• 字数: 3546字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5930.2004.05.001

摘要

目的构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体,研究其介导目的基因在肿瘤细胞内的定向表达能力.方法将端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子克隆入质粒pDC312的多克隆位点构成外源基因表达盒,在基因表达盒上下游分别插入1个绝缘子序列,构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体pSG-TPE;采用Luciferase报告基因进行hTERT启动子的活性分析;以pSG-TPE携带绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因,重组腺病毒AdTPE-EGFP,观察其介导EGFP在肿瘤细胞内的定向表达能力,并与CMV启动子控制的腺病毒AdCMV-EGFP作对照.结果 hTERT启动子在正常细胞内几乎没有活性,而在肿瘤细胞内的活性与SV40启动子相近.腺病毒AdTPE-EGFP能介导EGFP在肿瘤细胞内定向而稳定表达,在正常细胞内不表达,而对照腺病毒AdCMV-EGFP在肿瘤和正常细胞内均表达EGFP.结论靶向端粒酶阳性肿瘤的腺病毒载体pSG-TPE,不但提高了对基因表达调控的特异性,而且降低了对正常细胞毒性作用.绝缘子的应用隔断了外源基因表达盒和病毒基因表达调控序列之间的互相干扰,进一步提高目的基因的表达效率.该载体对肿瘤的靶向基因治疗具有重要的应用价值.