应用抑制性消减杂交技术筛选膦甲酸钠免疫调节基因

• 作者: 刘妍 张喜全 成军 王刚 王建军 王祥建 陆荫英
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 膦甲酸钠 免疫调节 抑制性消减杂交 基因克隆
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 527-529
• 页数: 3页
• 分类号: R512.63
• 字数: 3272字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.06.021

摘要

目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建膦甲酸钠(PFA)处理的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆PFA免疫调节相关基因,阐明PFA免疫调节的分子生物学机制.方法以PFA处理Jurkat细胞,同时以生理盐水处理的相同细胞作为对照;24h后制备细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa I酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性多聚酶链反应(PCR)扩增,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果成功构建了PFA处理淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后得到46个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～1 000bp插入片段.挑取含有插入片段的14个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得11种已知基因序列和3个未知基因.结论应用SSH技术成功构建了PFA处理的淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库,为进一步阐明PFA的免疫调节机制及深入了解PFA防治病毒性肝炎的药理作用机制提供了依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王刚		6	8	2.0	2.0
2	刘妍		1	3	1.0	1.0
3	成军		1	3	1.0	1.0
4	陆荫英		1	3	1.0	1.0
5	王建军		1	3	1.0	1.0
6	张喜全	江苏省连云港市正大天晴制药有限公司药物研究所	2	3	1.0	1.0
7	王祥建	江苏省连云港市正大天晴制药有限公司药物研究所	1	3	1.0	1.0