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摘要:
目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建膦甲酸钠(PFA)处理的人T淋巴细胞Jurkat差异表达基因的cDNA消减文库,筛选并克隆PFA免疫调节相关基因,阐明PFA免疫调节的分子生物学机制.方法以PFA处理Jurkat细胞,同时以生理盐水处理的相同细胞作为对照;24h后制备细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa I酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性多聚酶链反应(PCR)扩增,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果成功构建了PFA处理淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库.文库扩增后得到46个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到200~1 000bp插入片段.挑取含有插入片段的14个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得11种已知基因序列和3个未知基因.结论应用SSH技术成功构建了PFA处理的淋巴细胞差异表达基因的cDNA消减文库,为进一步阐明PFA的免疫调节机制及深入了解PFA防治病毒性肝炎的药理作用机制提供了依据.
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内容分析
关键词云
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文献信息
篇名 应用抑制性消减杂交技术筛选膦甲酸钠免疫调节基因
来源期刊 解放军医学杂志 学科 医学
关键词 膦甲酸钠 免疫调节 抑制性消减杂交 基因克隆
年,卷(期) 2004,(6) 所属期刊栏目 实验研究
研究方向 页码范围 527-529
页数 3页 分类号 R512.63
字数 3272字 语种 中文
DOI 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.06.021
五维指标
作者信息
序号 姓名 单位 发文数 被引次数 H指数 G指数
1 王刚 6 8 2.0 2.0
2 刘妍 1 3 1.0 1.0
3 成军 1 3 1.0 1.0
4 陆荫英 1 3 1.0 1.0
5 王建军 1 3 1.0 1.0
6 张喜全 江苏省连云港市正大天晴制药有限公司药物研究所 2 3 1.0 1.0
7 王祥建 江苏省连云港市正大天晴制药有限公司药物研究所 1 3 1.0 1.0
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研究主题发展历程
节点文献
膦甲酸钠
免疫调节
抑制性消减杂交
基因克隆
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
解放军医学杂志
月刊
0577-7402
11-1056/R
大16开
北京100036信箱188分箱
2-74
1964
chi
出版文献量(篇)
8116
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11
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57068
相关基金
军队杰出人才基金
英文译名:
官方网址:
项目类型:
学科类型:
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
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