脱氧核酶在转基因肝癌细胞中对HCV 5'-非编码区的抑制活性

• 作者: 于乐成 刘鸿凌 毛青 王升启 陈忠斌 顾长海
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脱氧核糖核酸酶类 C型肝炎样病毒属 5'-非翻译区 HepG2.9706细胞 基因疗法
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 82-85
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 2544字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1000-6680.2004.02.003

摘要

目的观察特异性脱氧核酶(DRz)在丙型肝炎病毒(HCV)5'-非编码区(5'-NCR)转基因肝癌细胞株中对靶RNA的抑制活性.方法采用5'-GGCTAGCTACAACGA-3'基序为活性中心,分析HCV 5'-NCR中符合5'…R↓Y…3'(R=A/G,Y=U/C)特征的位点及5'-NCR的二级结构以确定靶位,设计并合成HCV靶向性脱氧核酶DRz-232、DRz-127、DRz-84、DRz1以及对应的两端被硫代修饰的DRz(TDRz)和活性中心区人工突变的硫代DRz(MDRz).用脂质体转染法将导入HCV 5'-NCR及部分C区(5'-NCR-C)的转基因肝癌细胞株HepG2.9706中,作用一定时间后,用化学发光法检测荧光素酶活性的变化,计算抑制率.选择抑制率较高者进行时效关系的观察和不同浓度抑制效果的比较.结果各DRz和对应TDRz的活性无明显差别.DRz-127/TDRz-127和DRz1/TDRz1的抑制活性相对较高,终浓度为0.5μmol/L作用24 h抑制率分别达53.2%/50.6%和44.7%/43.3%.各DRz/TDRz的抑制率均高于对应的MDRz,其中DRz-127/TDRz-127与MDRz-127(41.2%)相比抑制率有显著性差异,P＜0.05.在0.25～0.75 μmol/L范围,抑制率随药物浓度的升高而增高.在所观察的时间点中,加药后24 h抑制率最高,3 d后抑制率显著下降;DRz抑制率的下降快于TDRz.结论靶位合适的HCV特异性脱氧核酶在转基因肝癌细胞中对靶RNA可能既存在反义抑制作用,又存在剪切活性,可能是一种有希望的抗病毒基因治疗手段.经适当硫代修饰的TDRz在细胞内可能更稳定.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王升启	北京军事医学科学院放射医学研究所	10	94	6.0	9.0
2	陈忠斌	北京军事医学科学院放射医学研究所	2	18	2.0	2.0