转粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因真核表达质粒的构建及生物活性鉴定

• 作者: 付素珍 原志庆
• 来源期刊: 实用儿科临床杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 转粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因 真核表达质粒 红白血病
• 年，卷（期）: 2004,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 567-569
• 页数: 4页
• 分类号: R725.5
• 字数: 2978字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-515X.2004.07.015

摘要

目的构建小鼠转粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF)真核表达质粒pcDNA3-GM-CSF, 转染红白血病细胞系FBL-3,并鉴定其活性.方法采用分子克隆技术,构建mGM-CSF真核表达质粒pcDNA3-GM-CSF, 电穿孔法将其导入红白血病细胞系FBL-3,G418筛选G418抗性细胞,限制性稀释法筛选G418抗性细胞克隆.PCR和RT-PCR方法鉴定GM-CSF基因整合和稳定表达.骨髓造血祖细胞增殖实验和骨髓造血祖细胞集落刺激实验鉴定其生物学活性.结果采用PCR方法扩增mGM-CSF cDNA序列,BamH Ⅰ和EcoRⅠ双酶切后装入pcDNA3质粒,构建真核表达质粒pcDNA3-GM-CSF,酶切和测序结果与预期相符,无插入、丢失、突变,方向正确.PCR和RT-PCR结果显示,GM-CSF基因整合到受体细胞染色体中并稳定表达.表达GM-CSF的FBL-3-GM-CSF细胞培养上清可明显刺激小鼠骨髓单个核细胞增殖,并能刺激干细胞形成克隆,形成克隆数为(54.67±4.83)个,形成率为0.547 %.结论构建mGM-CSF真核表达质粒pcDNA3-GM-CSF, 获得稳定表达该基因并具有生物学活性的细胞克隆,为制备转GM-CSF基因瘤苗,探索白血病免疫治疗的可行性奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	原志庆	新乡医学院病理学教研室	27	74	5.0	7.0