菌落PCR快速分析抗体库重组率时的假阳性现象

• 作者: 包国强 张思河 邢金良 陈志南
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 菌落PCR 质粒PCR 限制性酶切 重组率 噬菌体抗体库
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 248-250
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 2553字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.03.017

摘要

目的评价菌落PCR法鉴定噬菌体抗体库阳性重组率的可靠性. 方法鼠抗体基因Lc片段、Fd片段经酶切、纯化后,依次克隆入pComb3载体上相应的酶切位点,电转化XL1-blue菌后建立鼠源性Fab噬菌体抗体库.比较菌落PCR法、质粒PCR法及质粒酶切法鉴定转化菌阳性重组率的一致性.同时用空菌、空载体、空载体菌等作模板为对照PCR,以排除相关组分的干扰. 结果建立的Lc库的库容为1.175×106CFU, Fab库的库容为1.02×106CFU.3种方法鉴定的阳性重组率不同(Lc的重组率依次为100%、78%、78%,Fd的重组率依次为90%、66%、66%,Lc与Fd同时插入的重组率依次为90%、50%、50%).菌落PCR法鉴定的重组率偏高,存在假阳性现象.对照PCR提示,XL1-blue菌本身可能是导致假阳性扩增的原因. 结论用菌落PCR法不能准确鉴定噬菌体抗体库的重组率,用质粒PCR法或质粒酶切法鉴定更为可靠.