人肝细胞生长因子基因腺病毒重组体的构建及转染血管平滑肌细胞的表达

• 作者: 于彭 冯宗承 孙达欣 张强 胡新华 辛世杰
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 分子生物学 肝细胞生长因子基因腺病毒重组体的构建 基因重组 基因表达,肝细胞生长因子 腺病毒载体 同源重组 血管平滑肌细胞 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 263-266
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 3848字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2004.03.004

摘要

为探讨构建能表达肝细胞生长因子基因的腺病毒重组体的方法,以及这种腺病毒重组体能否在血管平滑肌细胞表达.将含有肝细胞生长因子基因片段的质粒用限制内切酶酶切,以琼脂糖凝胶电泳回收得到目的基因片段;将它用DNA连接酶插入至腺病毒穿梭质粒中,并用限制内切酶鉴别插入方向,得到插入方向正确的重组腺病毒穿梭质粒.用限制内切酶酶切重组腺病毒穿梭质粒和表达载体,使它们线性化;以电转化方法使它们共转化至BJ5183细胞中进行同源重组,构成肝细胞生长因子基因腺病毒重组体.以脂质体为转染介质,将肝细胞生长因子基因腺病毒重组体转染到人胚肾细胞中进行包装,使病毒复性具有感染能力.用包装后的肝细胞生长因子基因腺病毒重组体感染体外培养的大鼠主动脉平滑肌细胞;经逆转录-聚合酶链反应和蛋白印迹检测发现肝细胞生长因子呈现过表达.此外,酶切及测序发现重组腺病毒穿梭质粒和肝细胞生长因子基因腺病毒重组体是正确的;绿色荧光蛋白标记对重组体在人胚肾细胞中的包装及包装后感染大鼠主动脉平滑肌细胞进行了荧光示踪.结果提示,肝细胞生长因子基因腺病毒重组体构建成功,为血管疾病转基因治疗奠定了基础,具有一定临床价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	辛世杰	中国医科大学附属第一医院外科	117	359	10.0	13.0
2	于彭	中国医科大学附属第一医院外科	2	36	2.0	2.0
3	胡新华	中国医科大学附属第一医院外科	58	302	9.0	14.0
4	张强	中国医科大学附属第一医院外科	150	996	12.0	26.0
5	孙达欣	中国医科大学附属第一医院外科	13	39	4.0	5.0
6	冯宗承	中国医科大学附属第一医院外科	3	12	2.0	3.0