aroA-In融合基因载体的构建、表达及对烟草的转化

• 作者: 费云标 赵瑾 高素琴 魏令波
• 来源期刊: 遗传学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白剪接 EPSPS 转基因 烟草
• 年，卷（期）: 2004,（11）
• 所属期刊栏目: 植物和微生物遗传学
• 页码范围: 1294-1301
• 页数: 8页
• 分类号: Q943.2
• 字数: 4942字
• 语种: 中文

摘要

PCR扩增突变的5'-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(5'-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthetase,EPSPS) cDNA全长序列,插入pLitmus28得到pLEPSPS,进而通过反向PCR在EPSPS 235/236 aa之间将其打断为无功能的片段.选用人工构建的具有顺式和反式剪接功能的mini型蛋白内含子Ssp DnaB和Rma DnaB,插入被打断的aroA(抗除草剂基因),构建了质粒 pLEBC、pLEBT、pLERC和pLERT.将4种重组质粒中的aroA-In(蛋白内含子Intein插入aroA)融合基因插入pET-32得到表达载体pETLEBC、pETLEBT、pETLERC 和pETLERT,IPTG诱导后,SDS-PAGE分析显示其能在DE3中有效表达并发生相应的蛋白剪接.将aroA-cis Ssp DnaB 和 aroA -cis Rma DnaB融合基因分别插入pLYM中进一步构建成植物表达载体,农杆菌叶盘法转化烟草.基因组PCR分析表明融合基因整合入植物核基因组;RT-PCR分析显示其可在高等植物细胞中成功表达.结果说明蛋白内含子基因可以转化高等真核细胞,蛋白剪接技术可应用于高等植物细胞,从而为防止植物转基因扩散提供了一条新的途径.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵瑾	中国科学院遗传与发育生物学研究所	13	37	4.0	5.0
2	高素琴	中国科学院遗传与发育生物学研究所	2	34	2.0	2.0
3	费云标	中国科学院遗传与发育生物学研究所	4	91	4.0	4.0
4	魏令波	中国科学院遗传与发育生物学研究所	6	84	5.0	6.0