可控细胞膜孔形成蛋白基因的克隆与表达

• 作者: 孙怀昌 施伟庆 陈芹
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 α溶血素基因 突变 原核表达 可控膜孔形成蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（7）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: S852.611:Q786
• 字数: 3626字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2004.07.004

摘要

根据Wood 46株金黄色葡萄球菌α溶血素(α-HL)基因序列设计了引物,用高保真PCR从1800株金黄色葡萄球菌基因组DNA中扩增出了0.9 kb的α-HL基因,序列测定结果显示,两菌株α-HL基因的核苷酸序列有6个碱基差异,但仅引起1个氨基酸替换.用PCR分段克隆和定点突变技术将大肠埃希氏菌外膜蛋白A信号肽序列与α-HL编码区融合,并将其第130～134位氨基酸替换为5个连续的组氨酸,获得的融合基因命名为H5基因.将其克隆入pET-30a质粒,用获得的重组质粒pET-H5转化感受态大肠埃希氏菌,获得分泌性表达H5的重组菌.经IPTG诱导后,重组菌表达出分子质量为35 ku的H5蛋白.经镍柱亲和层析纯化的H5对兔红细胞的半数溶血值为180 ng/mL,能使鼠成纤维细胞PA317获得对台盼蓝和海藻糖的通透性,且能被Zn2+抑制.提示,表达的H5蛋白为可控细胞膜孔形成蛋白,能用作真核细胞内玻璃态保存的渗透剂.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙怀昌	扬州大学兽医学院	138	1042	15.0	25.0
2	陈芹	扬州大学兽医学院	6	35	3.0	5.0
3	施伟庆	扬州大学兽医学院	7	111	5.0	7.0