利用易错PCR随机突变技术突变EPSPs基因研究草甘膦抗性机理

• 作者: 刘柱 刘秀敏 张怀江 李国勋 林敏 梁爱敏 陆伟 陈明
• 来源期刊: 高技术通讯
• 关键词: 易错PCR 随机突变 草甘膦抗性 EPSPs基因 二级结构预测
• 年，卷（期）: 2004,（12）
• 所属期刊栏目: 生物与现代农业技术
• 页码范围: 37-42
• 页数: 6页
• 字数: 4263字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1002-0470.2004.12.009

摘要

运用易错PCR介导的随机突变技术使高抗草甘膦的菌株的5-烯醇式丙酮酸-3-磷酸莽草酸合酶 (5-Enolpyruvylshikimate-3-phosphate,EPSPs) 基因发生随机突变,转入EPSPs基因缺陷型的大肠杆菌ER2799中,通过互补试验获得对草甘膦抗性明显降低的突变株AZ100.测序结果发现AZ100的EPSPs基因与未突变基因相比,碱基序列发生了两个位点变化,第792位的碱基由鸟嘌呤(G)突变为胸腺嘧啶(T),第1203位的碱基由胞嘧啶(C)突变为鸟嘌呤(G).氨基酸序列也发生了相应的变化,第264位由甘氨酸(Gly)突变为缬氨酸(Val),第401位由丙氨酸(Ala)突变为甘氨酸(Gly).二级结构预测显示此两个突变的氨基酸的位点恰好位于EPSPs与底物结合的关键部位.这两个氨基酸位点的突变,导致EPSPs在有草甘膦存在的情况下活性降低,从而导致菌株的草甘膦抗性降低.将这两个突变的碱基位点与美国的专利保护位点比较,发现这两个突变位点均不在专利保护范围之内.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陆伟	中国农业科学院生物技术研究所	34	448	12.0	20.0
2	李国勋	河北农业大学植保学院	25	333	11.0	17.0
3	陈明	中国农业科学院生物技术研究所	68	619	13.0	23.0
4	刘柱	中国农业科学院生物技术研究所	3	11	1.0	3.0
5	张怀江	河北农业大学植保学院	2	23	2.0	2.0
6	梁爱敏	河北农业大学植保学院	2	15	2.0	2.0
10	刘秀敏	中国农业科学院生物技术研究所	4	27	3.0	4.0