细胞周期蛋白D1 RT-PCR ELISA的建立及其初步应用

• 作者: 刘为纹 史景泉 常杭花 府伟灵 张雪 徐采朴 陈兵
• 来源期刊: 世界华人消化杂志
• 学科: 医学
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 研究快报
• 页码范围: 473-475
• 页数: 3页
• 分类号: R3
• 字数: 2783字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-3079.2004.02.059

摘要

目的:建立一种灵敏、特异和简便实用的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA表达水平的检测手段.方法:生物素标记Cyclin D1 5'端引物,PCR DIG Labeling Mix取代dNTP,RT-PCR终产物置于链霉亲和素包被的ELISA板中孵育,洗涤、显色后,自动酶联检测仪测A45onm值.常规RT-PCR方法作对照.检测对象包括Cyclin D1表达细胞系SGC7901,转染反义Cyclin D1基因的SGC7901D1AS细胞及转染空载体的SGC7901neo细胞,原发性胃癌组织30例、胃癌旁和正常胃黏膜组织20例,胃良性病变组织22例.结果:RT-PCR ELISA与RT-PCR琼脂糖电泳检测结果吻合,所测得的A450nm值与Cyclin D1特异性基因片段的丰度和检测细胞数量有一很好的对应关系.SGC7901胃癌细胞转染Cyclin D1反义基因后,Cyclin D1mRNA表达显著降低(P＜0.05).Cyclin D1 mRNA在胃良性疾病起即开始明显升高(P＜0.05).在胃癌各组中,进展期胃癌伴转移组的Cyclin D1 mRNA表达水平显著高于其他两组(P＜0.05).结论:本文建立的Cyclin D1 RT-PCR ELISA可作为一种侯选的、较为简便和半定量的cyclin D1 mRNA检测方法.致谢:第三军医大学数学教研室罗明奎主任在本课题结果统计分析的工作中给予了无私的指导和帮助.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘为纹	中国人民解放军第三军医大学西南医院消化科	28	380	12.0	19.0
2	徐采朴	中国人民解放军第三军医大学西南医院消化科	11	110	5.0	10.0
3	张雪	中国人民解放军第三军医大学西南医院检验科	24	151	4.0	12.0
4	常杭花	重庆市第九人民医院胃镜室	6	121	2.0	6.0
5	府伟灵	中国人民解放军第三军医大学西南医院检验科	2	0	0.0	0.0
6	陈兵	中国人民解放军第三军医大学西南医院内分泌科	16	27	3.0	5.0