用CDR3导向抗体库法对鼠抗人膀胱癌单抗进行人源化

• 作者: 俞莉章 周丽君 张海荣 张达衿 王堃 王琰 陈晓穗
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 噬菌体抗体库 鼠单抗人源化 loxp-cre重组系统 膀胱癌
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 基因工程技术
• 页码范围: 150-154
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 5996字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.02.026

摘要

目的构建含鼠单抗CDR3的人源噬菌体抗体库,对膀胱癌鼠单抗进行人源化. 方法通过重叠PCR及DNA重组技术,将抗膀胱癌鼠单抗BDI的CDR3区与人淋巴细胞来源的多样化的VH和Vκ组合,构建含BDI CDR3的人源噬菌体抗体库;利用loxp-cre定位重组系统,增加轻、重链的组合配对,获大容量抗体库;用膀胱癌细胞(EJ)从中筛选人源化抗膀胱癌单抗Fab段,ELISA方法对所筛克隆进行特异性鉴定,同时运用竞争抑制实验对所筛特异性克隆进行抗原表位的核实. 结果首先构建了库容为2×107的含鼠CDR3区的人源噬菌体抗体库;经过在cre+细菌胞内的定位重组后,获得库容为1010的大容量噬菌体抗体库;用EJ细胞筛选到可与其特异结合的人源性Fab段;竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源单抗结合同一抗原表位. 结论在没有亲本鼠单抗基因,仅了解其CDR3序列的条件下,可通过CDR3导向,构建大容量抗体库,筛选到相应的人源化抗体基因.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王琰		15	176	9.0	13.0
2	俞莉章	北京大学第一医院泌尿外科研究所	18	88	6.0	9.0
3	周丽君		5	13	2.0	3.0
4	王堃		2	4	1.0	2.0
5	陈晓穗		5	45	4.0	5.0
6	张海荣		3	13	1.0	3.0
7	张达衿		1	1	1.0	1.0