地高辛标记引物酶显色法检测HBV基因多态性及应用

• 作者: 孙悦 张冬雷 张芹 王万相 王惠民 蒋玲 赵建龙 郭乃洲 马达
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DNA芯片 乙型肝炎病毒 基因多态性 地高辛
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 408-411
• 页数: 4页
• 分类号: R513.2
• 字数: 3179字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-764X.2004.06.002

摘要

目的建立地高辛标记引物酶显色法,用于DNA芯片检测HBV基因多态性,并对实验条件进行优化.方法用地高辛标记引物进行HBV DNA前C/C区和P区双重PCR,制备含地高辛标记的DNA样品目的片段,并将目的片段杂交于含HBVDNA核苷酸序列野生型及突变型探针的DNA芯片上,用抗地高辛抗体-碱性磷酸酶进行显色,并转印于尼龙膜上,最后用光学扫描仪读取结果.结果通过一次杂交反应同时获取HBV DNA前C/C区(1 896、1 814)、BCP区(1 762、1 764)和P区(552)位点的信息.杂交温度与时间为42℃1 h、酶作用和显色时间分别为30 min和45 min时结果较理想,采用高盐浓度洗涤获满意杂交信号,批内CV均在15%左右,敏感度为2.0×103拷贝/ml.50例乙型肝炎患者突变率52.0%(26/50),以上各位点突变率分别为34.0%、22.0%、38.0%、38.0%、4.0%.结论地高辛标记引物酶显色法用于芯片检测HBV基因常见位点多态性,简便易行,试剂成本显著降低,不需特殊设备,易于临床推广应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵建龙		4	11	2.0	3.0
2	王惠民	南通医学院附属医院	60	307	10.0	14.0
3	张冬雷	南通医学院附属医院	27	96	6.0	9.0
4	马达	盐城市第一人民医院检验科	19	63	5.0	7.0
5	蒋玲	盐城市第一人民医院检验科	4	6	1.0	2.0
6	王万相	盐城市第一人民医院检验科	18	56	5.0	6.0
7	郭乃洲	盐城市第一人民医院检验科	18	53	5.0	6.0
8	张芹	南通医学院附属医院	7	24	3.0	4.0
9	孙悦		1	5	1.0	1.0