乙型肝炎病毒表面抗原基因启动子Ⅰ结合蛋白1反式调节基因的筛选

• 作者: 刘妍 张玲霞 成军 戴久增 洪源 王琳 钟彦伟 陈菊梅
• 来源期刊: 胃肠病学和肝病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 乙型肝炎病毒 DNA结合蛋白 基因芯片
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 11-13
• 页数: 3页
• 分类号: R373.2
• 字数: 2641字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-5709.2005.01.004

摘要

目的应用表达谱基因芯片技术,研究乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原基因启动子DNA结合蛋白1(SBP1)反式调节基因,阐明SBP1蛋白可能的分子生物学功能.方法设计并合成SBP1基因序列特异性的引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增SBP1基因片段,以常规的分子生物学技术将获得的SBP1编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列测定,构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-SBP1.以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2,提取mRNA,逆转录为cDNA,与转染空表达载体pcDNA3.1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析.结果构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定,证实准确无误.提取高质量的mRNA,逆转录为cDNA,进行cDNA芯片分析.在1152个基因容量的表达谱芯片的筛选中,发现有12个基因表达水平显著上调,6个基因表达水平显著下调.结论应用基因表达谱芯片成功筛选了SBP1转染细胞后差异表达基因,为进一步阐明SBP1蛋白可能的生物学功能提供依据.