大肠杆菌不耐热肠毒素基因克隆和无毒突变体mLT63的构建及序列分析

• 作者: 代丽萍 康巧珍 段广才 申晓靖 郗园林
• 来源期刊: 河南医学研究
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌 不耐热肠毒素 定点诱变 突变体 SDS裂解法
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 100-103
• 页数: 4页
• 分类号: R543.1
• 字数: 3560字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-437X.2005.02.002

摘要

目的:大肠杆菌不耐热肠毒素(LT)是很强的免疫原,也具有很强的粘膜免疫佐剂作用,但LT的毒性限制了它在人类疫苗中使用.本研究希望通过定点诱变构建无毒或减毒并保持LT免疫学特性的突变体.方法:以人源肠毒素大肠杆菌(ETEC)菌株E.coli 44815为研究对象,应用本研究室改进的SDS裂解法小量制备含LT基因的野生大质粒,PCR扩增LT基因,构建重组质粒pNEB193-elt;采用重叠延伸法PCR对LT第63位氨基酸进行体外定点诱变,构建LT突变基因的重组克隆载体,测序并进行序列分析鉴定.结果:采用本研究室改进的SDS裂解法,可成功地小量提取满足扩增模板要求的大质粒;所克隆的LT基因与GenBank公布的一致;定点诱变正确,无非特异性突变.结论:克隆的LT野生基因和定点诱变基因可用于构建重组表达载体,表达重组蛋白,对其粘膜免疫佐剂性或其他相关特性进一步研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	段广才	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室	174	980	15.0	21.0
2	代丽萍	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室	53	273	9.0	13.0
3	郗园林	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室	119	673	13.0	20.0
4	康巧珍	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室	32	117	7.0	9.0
5	申晓靖	郑州大学公共卫生学院流行病学教研室	1	11	1.0	1.0