大肠杆菌LTKA63突变体的构建及重组LTKA63免疫佐剂活性机理的研究

• 作者: 全胜 夏肖萍 胡伟航
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 大肠杆菌 LTKA63基因 克隆/表达载体构建,重组蛋白/表达,粘膜免疫/佐剂活性 Th1/Th2
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 107-110
• 页数: 4页
• 分类号: R378.2
• 字数: 2982字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2006.02.003

摘要

目的构建大肠杆菌不耐热肠毒素A亚单位(heat-labile enterotoxin subunit A, LTA)基因减毒突变体LTKA63及其原核表达系统,探讨重组LTKA63(rLTKA63)粘膜免疫佐剂活性的机制.方法采用高保真PCR从大肠杆菌44815株基因组DNA中扩增LTA基因,利用定位突变技术构建LTKA63突变体,T-A克隆后测序.采用无His-tag的原核表达载体pET-15b,构建LTKA63原核表达系统,通过SDS-PAGE鉴定表达产物.采用三色流式细胞术确定rLTKA63激活T细胞途径.结果从大肠杆菌44815株DNA模板中扩增获得预期大小的LTA基因条带.与报道的LTA序列比较,所克隆的LTA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99.03%～99.61%和98.33%～99.22%.LTA基因定位突变后获得序列正确的LTKA63突变体.rLTKA63表达量占细菌总蛋白的15%左右.rLTKA63作用后Th1和Th2细胞较阴性对照组分别增加21.9%和36.2%.结论本文成功地构建了LTKA63原核表达系统,所表达的rLTKA能同时激活Th1和Th2细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡伟航	杭州市第一人民医院急诊科	27	94	6.0	7.0
2	全胜	杭州市第一人民医院急诊科	3	19	2.0	3.0
3	夏肖萍	浙江大学附属邵逸夫医院检验科	9	57	4.0	7.0