摘要:
目的:建立大鼠定量视神经损伤模型,介绍其制作方法. 方法: 健康Wistar大鼠90只,15只为正常组,只进行3%荧光金逆行标记视网膜神经节细胞,以对比正常大鼠左、右眼视网膜神经节细胞数量;另75只大鼠,其中左眼为损伤眼,右眼为未损伤眼,作为对照组,按损伤后存活时间不同分为1 d组、3 d组、7 d组、15 d组、30 d组,每组15只.应用40 g力的视神经夹在大鼠眼球后2 mm处夹视神经9 s,于处死前7 d采用双上丘注射3%荧光金标记双眼视网膜神经节细胞.取眼球标本并分离视神经至视交叉.视网膜铺片做荧光照相,并输入计算机图像分析仪计数视网膜神经节细胞.将视神经沿其长轴做切片在光镜下观察. 结果: 手术获取完整的大鼠眼球,并分离视神经至视交叉.视网膜神经节细胞计数,损伤组与对照组进行比较.正常组中,左眼195.76±36.12,右眼197.52±39.25,两者差异无显著(P>0.05);伤后1 d左眼165.12±26.36,右眼191.21±35.26,两者差异显著(P<0.01);伤后3 d左眼152.26±25.12,右眼192.16±32.12, 两者差异显著(P<0.01);伤后7 d左眼135.19±21.32,右眼189.26±26.16, 两者差异显著(P<0.01);伤后15 d左眼123.96±27.19,右眼191.76±25.29, 两者差异显著(P<0.01);伤后30 d左眼105.75±22.26,右眼186.56±23.76, 两者差异显著(P<0.01).损伤眼视神经损伤后不同时间RGCs计数逐渐下降(P<0.01);损伤处视神经肿胀、出血,胶质细胞排列紊乱,空泡样变性,随损伤后时间延长而加重. 结论: 应用40 g力视神经夹建立的定量视神经损伤动物模型是可行的,并可应用于视神经损伤修复的研究中,完整标本的获取需要较为熟练的手术技巧.