具有天然N端的小鼠高活性IL-18的高效表达与纯化

• 作者: 杨永杰 葛锡锐 陈松华
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: IL-18 RT-PCR 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 445-449
• 页数: 5页
• 分类号: R392.1
• 字数: 4167字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2005.06.002

摘要

IL-18是IL-1家族成员,与IL-1β相似,IL-18也是以前体形式合成,其成熟和分泌需要Caspase-1的作用.我们正确克隆了小鼠IL-18全长cDNA,并成功构建了真核表达载体pcDNA3-proIL-18,能在真核细胞COS7中得到正确表达;为了得到具有天然N端的成熟IL-18(mIL-18),IL-18 cDNA上Caspase-1的识别位点被转换成Factor Xa的作用位点,并克隆到原核表达载体pGEX-4T-1中,IPTG能大量诱导GST-IL-18融合蛋白的可溶性表达,经一步亲和纯化后,能得到30～50 mg融合蛋白/升菌;经过Factor Xa作用融合蛋白,能得到大量(5～8 mg/升菌)、高纯度(＞95%)的mIL-18.与商品化的IL-18相比,所得mIL-18能诱导小鼠脾细胞表达更高水平的IFN-γ,表现出更强的生物学活性,这为进一步在小鼠系统中研究IL-18的功能、人成熟IL-18蛋白的高效表达、纯化以及其后可能的临床应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨永杰	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院研究生院	5	19	3.0	4.0
2	葛锡锐	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院研究生院	13	104	6.0	10.0
3	陈松华	中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所中国科学院研究生院	4	24	3.0	4.0