猪IL-18基因的原核表达及重组蛋白的纯化

• 作者: 唐满华 唐秀英 朱文冠 李琳 温纳相 程含波 裴仉福 陈瑞爱
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪白细胞介素-18基因 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2006,（10）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 842-846
• 页数: 5页
• 分类号: S852.42|Q785
• 字数: 4028字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2006.10.015

摘要

以pcDNA3.1-pIL-18为模板,采用PCR技术扩增到了猪白细胞介素18(IL-18)的成熟蛋白基因,通过Kpn Ⅰ+SacⅠ双酶切及连接反应,构建了pET32c-pIL-18原核表达质粒.经过限制性内切酶分析、PCR鉴定及DNA序列测定证实,重组质粒中的基因片段连接正确.之后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),于37℃、1.0 mmol/L IPTG条件下诱导表达.菌体裂解产物经SDS-PAGE分析,在分子质量约为33 ku处出现了预期的目的蛋白.用8 mol/L脲对表达产物变性,经Ni2+-NTA柱纯化,透析复性,得到了纯化的IL-18蛋白.Western-blot分析证实,纯化的重组IL-18蛋白具有反应活性.上述研究结果为重组IL-18的应用奠定了基础.