人巨细胞病毒pp65核酸疫苗的构建、表达与动物免疫效应

• 作者: 孙宏彬 季育华 张玥 谈意隽
• 来源期刊: 现代免疫学
• 学科: 医学
• 关键词: 人巨细胞病毒 pp65 核酸疫苗 细胞免疫
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 461-464
• 页数: 4页
• 分类号: R392.11
• 字数: 2869字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-2478.2005.06.005

摘要

构建真核重组表达质粒PVAX1-pp65,通过对其表达产物的鉴定和免疫小鼠实验,探讨PVAX1-pp65载体对诱导免疫应答的效果及方式.用已构建的原核表达载体pp65-pet32a,经酶切后与DNA疫苗载体PVAX1连接,构建HCMVpp65核酸疫苗(PVAX1-pp65).用脂质体法将其转染293细胞,经间接免疫荧光、免疫印迹试验来验证其表达的产物.同时,免疫小鼠后取其脾脏细胞,经流式细胞仪检测其CD4+和CD8+T细胞;并利用MTT法测定免疫小鼠的T细胞对ConA和重组pp65蛋白刺激后的增殖活性.结果显示构建的真核表达载体PVAX1-pp65,经测序验证其序列正确.体外转染实验结果表明转染重组质粒的细胞胞浆内呈现与特异性pp65单克隆抗体反应的颗粒状荧光产物,免疫印迹试验也显示重组质粒转染的细胞裂解物中有pp65蛋白条带.另外,免疫小鼠脾CD8+T细胞的含量明显高于对照组;免疫鼠脾细胞对重组pp65抗原蛋白的刺激后增殖反应明显.综上结果证实,成功地构建了HCMVpp65核酸疫苗,并能有效地表达,表达的蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性.HCMVpp65 DNA疫苗可诱导小鼠产生针对HCMV的特异性细胞免疫应答,可作为一种有应用前景的核酸疫苗进一步深入研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张玥	上海交通大学医学院附属瑞金医院临床实验诊断中心	16	42	4.0	5.0
2	季育华	上海交通大学医学院附属瑞金医院临床实验诊断中心	26	108	7.0	9.0
3	孙宏彬	上海交通大学医学院附属瑞金医院临床实验诊断中心	1	1	1.0	1.0
4	谈意隽	上海交通大学医学院附属瑞金医院临床实验诊断中心	3	4	1.0	1.0