利用抑制消减杂交技术构建变形链球菌高毒力株特异的基因文库

• 作者: 史俊南 张莹 郭丽宏
• 来源期刊: 华西口腔医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 变形链球菌 抑制消减杂交 基因组DNA
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 专栏论著
• 页码范围: 524-528
• 页数: 5页
• 分类号: R781.1
• 字数: 5524字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-1182.2005.06.020

摘要

目的构建c血清型变形链球菌高毒力株特异的基因文库,为变形链球菌毒力基因的筛选奠定基础.方法从一对c血清型变形链球菌高、低毒力株中提取基因组DNA,用四碱基限制性内切酶酶切,以高毒力株的DNA酶切产物为tester DNA,低毒力株的DNA酶切产物为driver DNA,tester DNA连接接头后与driver DNA进行抑制消减杂交,并检测连接效率与消减效率.将获得的消减PCR产物与pCR2.1载体连接,转化E.coliTOP10F'感受态细胞,进行蓝白筛选.结果从识别四碱基序列的限制性内切酶中,筛选出Alu工,用于制备变形链球菌基因组DNA的代表性片段,产生的酶切产物位于0.1～2.0kb.testerDNA与接头的连接效率大于25%,抑制消减杂交后消减效率检测显示,同时存在于tester与driver DNA中的23S rRNA基因在消减组中出现时间较未消减组晚6个循环,将消减PCR产物克隆后,挑取96个转化子,构建高毒力株特异的基因文库.结论利用抑制消减杂交技术,进行c血清型变形链球菌高、低毒力株之间基因组DNA的比较,初次构建了高毒力株特异的基因文库.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	史俊南	第四军医大学口腔医院牙体病科	233	1011	15.0	20.0
2	郭丽宏	北京大学口腔医学院生物教研室	18	121	7.0	10.0
3	张莹	第四军医大学口腔医院牙体病科	62	257	8.0	12.0