以免疫活性串联片段FB为抗原检测FMDV抗体的间接ELISA方法

• 作者: 史泉城 曹永长 毕英佐 谢青梅 马静云
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 免疫活性串联片段 抗体 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2005,（8）
• 所属期刊栏目: 微生物学
• 页码范围: 605-610
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.6|R446
• 字数: 5708字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2005.08.005

摘要

将口蹄疫病毒免疫串联片段FB克隆至原核表达载体pBAD/TOPO中,得到重组质粒pBAD-FB,将此重组质粒转化到受体菌TOP10中,以不同浓度的阿拉伯醛糖进行诱导,并在不同诱导时间进行采样,经处理后做SDS-PAGE、Western-blotting分析.结果发现以终浓度为0.02g/L的阿拉伯醛糖进行诱导,4h后表达量可达高峰,其大小约为26ku,扫描结果显示,FB融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的28.9%,能与抗FMDV抗体发生特异性反应,融合蛋白以包涵体和可溶形式存在.将融合蛋白的可溶性组分用500g/L Ni-NTA树脂过柱纯化后作为包被抗原,成功地建立了检测血清中FMD抗体的间接ELISA方法.融合蛋白的最佳包被浓度是40μg/mL;标准阳性血清的最适稀释倍数为1∶160;最佳封闭液为50g/L脱脂奶粉和PBS;最佳封闭时间为1h.用建立的ELISA方法对采集的118份样品进行检测,并与全病毒包被抗原ELISA、间接血凝诊断试剂盒和UBI VP1抗体检测ELISA试验盒的检测结果比较,证明所建立的方法具有良好的特异性、敏感性和可重复性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毕英佐	华南农业大学动物科学学院	216	2631	28.0	41.0
2	曹永长	华南农业大学动物科学学院	111	1387	20.0	31.0
3	马静云	华南农业大学动物科学学院	87	548	13.0	19.0
4	谢青梅	华南农业大学动物科学学院	112	510	12.0	17.0
5	史泉城	华南农业大学动物科学学院	2	3	1.0	1.0