Ⅰ群禽腺病毒间接33K-ELISA检测方法的建立

• 作者: 刘加波 庞耀珊 罗思思 范晴 谢丽基 谢志勤 谢芝勋 邓显文
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: Ⅰ群禽腺病毒 33K蛋白 间接ELISA 优化
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 1405-1408
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j:issn.2095-1191.2012.09.1405

摘要

[目的]建立一种鉴别Ⅰ群禽腺病毒(FAVI)灭活苗免疫和野毒感染的检测方法,为FAVI的防控与净化提供技术支撑.[方法]以FAVI 33K重组蛋白为包被抗原,筛选和优化间接ELISA的条件,建立FAVI抗体的间接33K-ELISA检测方法,检验其特异性、敏感性和重复性,并鉴别检测FAVI活病毒感染血清和灭活苗免疫血清各50份.[结果]33K重组抗原最佳包被浓度6.0 μg/mL,包被条件为37℃孵育1 h后4℃过夜,最佳封闭液为5％脱脂奶,封闭时间1.0 h；待检血清稀释度1∶100,抗原抗体最佳作用时间1.0 h；酶标二抗最佳稀释度1∶3000,作用时间45 min.优化后的间接33K-ELISA的阴、阳性临界值为0.316.其特异性、敏感性、重复性试验及鉴别检测结果表明,优化后的间接33K-ELISA具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,且能成功鉴别FAVI感染与灭活疫苗接种.[结论]间接33K-ELISA操作简便、特异性强、灵敏度高、重复性好、适于批量检测,可有效鉴别FAVI感染和灭活苗免疫接种,利于挑选出FAVI感染动物,为FAVI的防控与净化提供了新思路和新方法.