重组腺相关病毒载体介导的人载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠ Milano在肌源性细胞C2C12中的表达

• 作者: 桂鸣 王志广 范乐明 蒋莉 陈琪 陈秀英 黄峻
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞生物学 动脉粥样硬化基因治疗 基因转移 腺相关病毒 载脂蛋白AⅠ 载脂蛋白AⅠMilano 肌源性细胞
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 146-150
• 页数: 5页
• 分类号: Q2
• 字数: 4523字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2005.02.006

摘要

目的以重组2型腺相关病毒为载体介导人载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠ Milano在小鼠肌源性细胞C2C12中的表达,探索一种崭新的预防、治疗动脉粥样硬化性疾病的途径.方法以正常人肝组织中抽提的RNA为模板,用逆转录聚合酶链反应获得人载脂蛋白AⅠ cDNA,点突变制备载脂蛋白AⅠ Mihno cDNA.分别将载脂蛋白AⅠ、载脂蛋白AⅠ Milano的cDNA插入重组2型腺相关病毒载体质粒,并与辅助质粒共转染包装细胞293T获得编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠ Milano的重组腺相关病毒载体,粗提后以冰乙醇法进行浓缩.斑点杂交检测重组2型腺相关病毒载体滴度,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度.分别用含载脂蛋白AⅠ或载脂蛋白AⅠ MihnocDNA的编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠ Milano的重组腺相关病毒对小鼠肌源性细胞C2C12进行感染,酶联免疫吸附法检测蛋白表达情况.结果聚合酶链反应产物序列正确,点突变成功.编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠ Milano的重组腺相关病毒的滴度均在2×1014个/L左右.重组2型腺相关病毒纯度良好.载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠ Milano分别获得0.39±0.04 mg/L和0.31±0.03mg/L的表达水平.结论成功制备表达载脂蛋白AⅠ或载脂蛋白AⅠ Mfiano的重组腺相关病毒载体,并在C2C12细胞中获得有效表达,为进一步探索方便、安全的预防和治疗动脉粥样硬化性疾病的方法打下了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蒋莉	南京医科大学动脉粥样硬化研究中心	29	264	10.0	15.0
2	范乐明	南京医科大学动脉粥样硬化研究中心	55	474	11.0	20.0
3	陈琪	南京医科大学动脉粥样硬化研究中心	78	442	11.0	18.0
4	黄峻	江苏省人民医院心内科	27	102	1.0	10.0
5	陈秀英	南京医科大学动脉粥样硬化研究中心	23	75	5.0	8.0
6	王志广	南京医科大学动脉粥样硬化研究中心	1	0	0.0	0.0
7	桂鸣	江苏省人民医院心内科	5	3	1.0	1.0