SARS冠状病毒S蛋白DNA疫苗的构建及其免疫效果研究

• 作者: 吴少庭 屈伸 张仁利 林绮萍 温见翔 潘晖榕 王西明 秦莉 袁仕善 雷明军 高世同 黄达娜
• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: SARS冠状病毒 棘突蛋白 DNA疫苗 棘突蛋白
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1042-1046
• 页数: 5页
• 分类号: R373.1
• 字数: 3950字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2005.12.004

摘要

目的构建SARS冠状病毒棘突糖蛋白(S蛋白)的两个片段S1和S2的真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2,检测它们在哺乳动物细胞中的表达,并观察它们在小鼠中诱导的体液和细胞免疫应答.方法采用PCR方法体外扩增SARS冠状病毒棘突糖蛋白的两个片段S1和S2的基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-S1和pVAC-S2重组质粒.并通过Lipofectamine 2000 将它们转染到HEK293细胞,RT-PCR和Western-blot鉴定重组质粒在真核细胞中的转录和表达.以构建的重组质粒直接免疫小鼠,ELISA检测小鼠血清特异性抗体以及抗体亚类,流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群分布.结果成功构建了重组真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2,并可在HEK293细胞中获得表达.免疫小鼠三次后,抗体滴度达到了1∶3 200.pVAC-S1诱导了高滴度的IgG2a,IgG2b和IgG1,pVAC-S2刺激产生高滴度IgG2a,IgG2b和较高滴度的IgG3.脾脏T淋巴细胞亚群分析示pVAC-S1和pVAC-S2两免疫组小鼠CD+3和CD+8T细胞明显升高.结论构建的真核表达质粒pVAC-S1和pVAC-S2能在哺乳动物细胞中表达,免疫小鼠后诱导了明显的细胞和体液免疫应答.