巴斯德毕赤酵母表达的突变型人白细胞介素-2的发酵条件与纯化研究

• 作者: 刘堰 欧阳克清 胡应和 苏畅 蔡绍皙
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 纯化 高效分泌表达 突变型人白介素-2 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 蛋白质工程
• 页码范围: 430-434
• 页数: 5页
• 分类号: Q786
• 字数: 4435字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2005.03.017

摘要

在以前的研究中,通过蛋白质工程技术获得了三突变体白细胞介素-2基因(编码125位半胱氨酸→丙氨酸;18位亮氨酸→蛋氨酸;19位亮氨酸→丝氨酸),并在毕赤酵母中加以表达.进一步优化表达条件,其最适诱导条件:80%以上的通气,诱导2 d,初始pH6.0,甲醇终浓度为1.0%.在上述条件下表达量占菌体总蛋白的30%以上,大约200mg/L.建立了一套从毕赤酵母表达上清中分离纯化分泌型表达蛋白IL-2的方法,经离心,超滤浓缩,强阳离子交换S柱和分子筛层析得到纯化的突变型和野生型IL-2;其得率为27%,纯度达电泳纯并且HPLC检测只有一个峰.纯化的突变蛋白对CTLL-2细胞具有刺激性;与野生型IL-2相比,在各种温度条件下储存的突变蛋白保留有更高的活性;突变型IL-2的活力是野生型的4～5倍,具有更高的利用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	蔡绍皙	重庆大学生物工程学院	220	1766	19.0	32.0
2	欧阳克清	重庆大学生物工程学院	20	196	9.0	13.0
3	胡应和	重庆大学生物工程学院	4	36	3.0	4.0
4	刘堰	西南师范大学生命科学学院	3	34	2.0	3.0
8	苏畅	西南师范大学生命科学学院	1	16	1.0	1.0