Red蛋白抗血清的制备及其亚细胞定位研究

• 作者: 张晓楠 李云峰 柴玉波 罗二平 陈南春 陈苏民 黄勇
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Red蛋白 多克隆抗体 瞬时转染
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 305-308
• 页数: 4页
• 分类号: Q754
• 字数: 3292字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1007-8738.2005.03.012

摘要

目的:在大肠杆菌中分别表达3种Red蛋白,并制备兔抗Red蛋白的抗体.方法:从λ噬菌体基因组中,通过PCR分别扩增gam、bet和exo DNA的全长序列.将PCR产物克隆入非融合表达载体pDH2中,构建Red蛋白的高表达工程菌.通过温敏诱导表达3种Red蛋白(Bet、Exo和Gam),用PACTE薄层扫描检测目的蛋白含量.用3种Red蛋白分别免疫家兔制备抗血清,并以Western blot鉴定抗体的效价和特异性.结果:大肠杆菌中表达的Bet、Exo和Gam蛋白,分别占菌体总蛋白量的40.3%、49.2%和73.4%.3种抗血清的效价约为1:2000.Western blot分析显示抗血清具有较好的特异性.结论:成功地获得Bet、Exo和Gam3种蛋白,并分别制备了相应的抗血清.使用这3种抗血清,检测了3种蛋白在真核细胞中的表达和定位,为研究Red蛋白的同源重组奠定了基础.