日本血吸虫(中国大陆株)14-3-3信号蛋白的真核表达

• 作者: 沈继龙 胡元生
• 来源期刊: 临床输血与检验
• 学科: 医学
• 关键词: 日本血吸虫 14-3-3信号蛋白 真核表达
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-7
• 页数: 4页
• 分类号: R383.2+4|R392.11
• 字数: 4015字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-2587.2005.01.002

摘要

目的从日本血吸虫成虫cDNA中扩增出信号蛋白Sj14-3-3编码基因,并亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),旨在制备重组诊断抗原和分子疫苗.方法提取日本血吸虫成虫总RNA,分离mRNA,RT-PCR法制备cDNA,并扩增出Sj14-3-3编码基因,通过线性TA克隆载体pGEM-T连接,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),经转染至COS-7细胞中表达,Western blotting鉴定.结果 RT-PCR 产物、pGEM-T-Sj14-3-3及pcDNA3.1(+)-Sj14-3-3分别经双酶切后均获得一特异性基因片段,经SDS-PAGE 及Western blotting鉴定后的分子量为29 kD.结论真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)-Sj14-3-3 在COS-7细胞中的表达产物是一分子量为29 kD的蛋白,并能被抗Sj14-3-3单克隆抗体识别.