野生型抑癌基因PTEN真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 张亚冰 张聚真 李肖蕖 杨观瑞 汲振余 禹丽娜 裘一兵 裘宋良 赵立群
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: PTEN 抑癌基因 真核表达载体
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1024-1028
• 页数: 5页
• 分类号: R756
• 字数: 3033字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2005.06.012

摘要

目的:构建野生型PTEN基因真核表达载体pcDNA3.0-PTEN,并进行鉴定.方法:参照野生型PTEN基因mRNA全序列,在cDNA两端各设计一条对应引物,并引入各自的酶切位点.从正常人外周血淋巴细胞中提取mRNA作为模板合成PTEN cDNA第一链,并扩增目的基因全表达序列片段,经双酶切后定向克隆至pcDNA3.0真核表达载体中,蓝白斑试验筛选阳性重组质粒.分别经双酶切、特异PCR及测序法对重组质粒进行鉴定.结果:双酶切和特异PCR结果表明克隆的基因片段约为1.2 kb;测序法进一步证实该基因为野生型PTEN编码基因,经NC-BI BLAST分析与GenBank中PTEN基因序列同源性为99.92%,编码的氨基酸同源性为100%.结论:成功构建了PTEN真核表达载体pcDNA3.0-PTEN,为研究PTEN在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础.